一、操作前准备
仪器检查
- 外观检查:查看仪器外壳是否有损坏、变形,显示屏及操作按键是否完好无损。检查仪器的散热孔是否通畅,有无杂物堵塞影响散热。
- 连接检查:确认仪器的电源线连接牢固,插头无松动、损坏现象。若仪器配备有外接打印机等设备,检查其连接是否正确。
- 内部检查:打开仪器的样本舱盖,检查加热模块表面是否干净,有无残留的液体、灰尘或杂物。若有,需使用干净的软布轻轻擦拭干净,避免影响后续实验。
试剂与耗材准备
- 根据实验需求,准备相应的核酸扩增检测试剂盒,确保试剂盒在有效期内,且保存条件符合要求。
- 准备好配套的一次性反应管(如 PCR 管),确保其无 RNase、DNase 污染,且与仪器的样本舱适配。
样本准备
- 对待测样本进行前处理,如提取核酸等,确保样本核酸的质量和浓度符合扩增实验的要求。
- 将处理好的样本按照试剂盒说明书的要求,与相应的反应试剂在反应管中准确配制反应体系。注意在配制过程中要严格遵守无菌操作原则,避免样本和试剂受到污染。
二、操作步骤
开机预热
接通仪器电源,打开仪器开关。仪器开机后,通常需要进行自我检测和预热,等待仪器达到稳定的工作温度,这个过程一般需要 5 - 15 分钟,具体时间可参考仪器说明书。在预热期间,仪器显示屏会显示相关的启动信息和温度变化情况。
程序设置
- 选择程序:预热完成后,通过仪器的操作按键或触摸屏进入程序设置界面。如果仪器预设了常用的核酸扩增程序,可根据实验类型(如新冠核酸检测、流感病毒核酸检测等)直接选择相应的预设程序。
- 参数调整(如有需要):若预设程序不能完全满足实验需求,可对程序参数进行适当调整。常见的参数包括变性温度、退火温度、延伸温度以及每个步骤的时间、循环次数等。参数的设置需依据所使用的试剂盒说明书以及具体的实验要求进行精确调整。
样本加载
将配制好反应体系的 PCR 管放入仪器的样本舱中,注意要按照样本舱的标识或布局整齐摆放,确保每个反应管都放置在正确的位置,且与加热模块充分接触,以保证温度均匀性和扩增效果。放置完毕后,轻轻关闭样本舱盖,确保舱盖密封良好。
启动扩增
样本加载完成且程序设置无误后,在仪器操作界面上点击“启动”按钮,仪器开始按照设定的程序进行核酸扩增反应。在扩增过程中,仪器显示屏会实时显示当前的运行状态,如当前循环数、每个步骤的剩余时间、反应温度等信息。
结果查看
- 实时荧光定量结果(若具备该功能):对于具有实时荧光定量功能的快速核酸扩增仪,在扩增过程中,仪器会自动收集荧光信号并进行数据分析。扩增结束后,可在操作界面上直接查看实时荧光定量的结果,如 Ct 值(循环阈值)等,用于判断样本中目标核酸的含量。
- 普通扩增结果:如果是普通的核酸扩增实验,扩增结束后,需将反应产物取出,通过琼脂糖凝胶电泳等后续方法进行检测分析,以确定是否成功扩增出目标核酸片段。
三、操作后处理
关机
扩增实验结束后,先打开样本舱盖,取出反应管。然后在仪器操作界面上选择“关机”选项,关闭仪器电源,拔下电源线插头。
清理仪器
使用干净的软布擦拭样本舱内部,去除可能残留的液体或杂物。若在实验过程中有液体溢出,需及时用湿布擦拭干净,并确保样本舱完全干燥后再关闭舱盖。
结果记录与报告
根据实验结果,准确记录相关数据,如样本信息、Ct 值(若有)、扩增结果判断等。按照实验室的规定和要求,及时出具实验报告。
维护保养
定期对仪器进行维护保养,如清洁仪器表面、检查仪器的性能参数等。按照仪器的维护手册,定期进行校准和维护,确保仪器始终处于良好的工作状态,以保证实验结果的准确性和可靠性。
四、注意事项
- 严格按照仪器的操作说明书进行操作,避免因误操作导致仪器损坏或实验失败。
- 实验过程中要注意防止样本和试剂受到污染,操作应在清洁、无菌的环境中进行,使用的耗材和试剂要妥善保存,避免交叉污染。
- 在仪器运行过程中,不要随意打开样本舱盖或进行其他可能干扰仪器正常运行的操作,以免影响扩增效果。
- 如遇仪器故障或报警提示,应立即停止操作,并查阅仪器说明书或联系专业维修人员进行处理,不要自行拆卸仪器。
- 不同品牌和型号的快速核酸扩增仪在操作和参数设置上可能会有所差异,在使用新的仪器或试剂盒时,务必仔细阅读相关的说明书和操作指南。